以下是大豆遗传转化的主要实验步骤：
本实验针对大豆品种进行遗传转化改良，主要流程包括：首先对大豆生长点进行预处理，为后续的基因导入做准备；接着通过农杆菌侵染的方法将目标基因导入生长点；之后利用特定配比的试剂来诱导不定芽的大量发生；待芽伸长后，利用RUBY显色和抗除草剂筛选标记对转化植株进行多轮筛选和鉴定。整个过程严格控制环境条件和培养参数，以确保转化效率和植株生长质量。最终经过分子检测和大田性状观察，筛选出具有目标性状改良的大豆株系，为品种改良提供材料基础。
| 要求类别 | 具体内容 | 技术标准 | 周期 | 交付物 |
|---|---|---|---|---|
| 种子提供 |
当年新收种子，无病斑、饱满无损伤 优先人工脱粒种子，避免机器脱粒 |
测试种150粒 正式转化种≥1000粒（依品种特性调整） |
- | 品种转化效率测试报告 |
| 客户提供载体/质粒/大肠杆菌 |
1. 自行构建载体需提供： • 完整序列信息 • 抗性基因说明 • 酶切位点图谱 • 引物序列及扩增条件 2. 大肠杆菌需提供： • 新活化甘油菌（-80℃保存） • 含载体的阳性克隆 |
1. 载体纯度：OD260/280≥1.8 2. 浓度：≥50ng/μl 3. 体积：≥20μl 4. 提供测序验证报告（如有） |
1周（材料验证） | 材料接收确认函 质检报告 |
| 客户委托构建载体 |
1. 提供基因信息： • 基因号（如NCBI登录号） • 完整DNA序列（含UTR区域） • 蛋白编码序列（CDS） 2. 载体设计要求： • 过表达/基因编辑类型选择 • 启动子/终止子偏好 • 筛选标记类型（抗生素/除草剂等） |
1. 载体构建周期： • 过表达载体：1周 • 基因编辑载体：2周 2. 质量标准： • 酶切验证+测序确认 • 提供完整载体图谱 |
过表达：1周 基因编辑：2周 |
载体测序报告 甘油菌样本 载体图谱 |
| 转基因检测服务 |
抗生素筛选（卡那霉素/潮霉素/氨苄青霉素等） 除草剂筛选（草甘膦/Bar等） PCR鉴定及测序验证 Southern杂交检测（拷贝数分析） qRT-PCR表达分析 Western blot蛋白表达检测 |
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| 服务流程与节点 |
实验启动
材料接收确认（1个工作日）
载体构建
1-2周（依载体类型而定）
转化测试
3周（品种适应性评估）
阳性筛选
含抗性筛选及分子鉴定
数据交付
汇总报告+统计数据+结题结论
关键节点自动短信通知，实验进度可通过客户管理系统实时查询
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实验材料保存：菌株/载体/受体材料免费保存6个月，电子版报告永久存档
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服务中向客户提供的数据、照片等资料，需满足完整性、规范性、准确性要求，按约定形式和时效交付，涉及保密信息的需遵守保密协议。
| 要求类别 | 具体内容 | 技术标准 | 周期 | 交付物 |
|---|---|---|---|---|
| 种子提供 |
当年新收种子，无病斑、饱满无损伤 优先人工脱粒种子，避免机器脱粒 |
测试种150粒 正式转化种≥1000粒（依品种特性调整） |
- | 品种转化效率测试报告 |
| 载体与菌株 |
自行构建载体需提供： 序列、抗性、酶切位点、引物等信息 |
大肠杆菌需提供： 新活化甘油菌（-80℃保存） |
1-2周（载体构建） | 载体测序报告 甘油菌样本 |
| 基因数据 |
提供基因号及DNA序列 无基因组数据库的基因需提供： 完整DNA序列和RNA序列 |
载体选择要求： 过表达/基因编辑类型 筛选标记类型（抗生素/除草剂等） |
- | 基因序列文档 载体方案书 |
| 检测项目 |
转基因抗性鉴定（抗生素/除草剂/其他） 转基因PCR鉴定及测序 转基因试纸条检测 表达水平荧光定量PCR鉴定 |
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| 服务流程 |
1. 载体构建及确认：过表达1周/基因编辑2周（含测序及效率验证） 2. 转化能力测试：3周（品种转化效率和再生能力评估） 3. 阳性苗筛选：含抗性筛选及分子鉴定 4. 结题报告：汇总报告+统计数据+结题结论 |
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实验材料保存：菌株/载体/受体材料免费保存6个月，电子版报告双方存档
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